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如何區分各種PCR技術(shù)?

 更新時(shí)間:2023-09-08 點(diǎn)擊量:492

PCR是一種用于放大擴增特定的DNA片段的分子生物學(xué)技術(shù),PCR技術(shù)有很多,那么我們應該如何區分各種PCR技術(shù)呢?讓我們一起來(lái)看看吧!

一、普通PCR

PCR是普通PCR,以雙鏈DNA為模板,以dNTP為底物,特異性地擴增雙鏈DNA。然后采用瓊脂糖凝膠電泳對產(chǎn)物進(jìn)行檢測,只能做定性分析。

二、實(shí)時(shí)熒光定量PCR

qPCR和Real-time PCR是實(shí)時(shí)熒光定量PCR,以cDNA為模板,以dNTP為底物,對擴增出的DNA進(jìn)行定量分析。實(shí)時(shí)熒光定量PCR常用的方法:水解探針?lè )ê蜔晒馊玖戏ā?/p>

三、逆轉錄PCR

RT-PCR 是逆轉錄PCR,采用 Oligo(dT) 或隨機引物利用逆轉錄酶反轉錄成 cDNA,再以 cDNA 為模板進(jìn)行 PCR 擴增,結果只能定性,不能定量。

四、實(shí)時(shí)熒光定量逆轉錄PCR

RT-qPCR是實(shí)時(shí)熒光定量逆轉錄PCR,是qPCR+RT-PCR的組合,將總RNA或mRNA逆轉錄成cDNA后再作為模板,以dNTP為底物,進(jìn)行qPCR的定量分析。

五、數字PCR

dPCR是數字PCR即三代PCR,是一種能夠實(shí)現核酸絕對定量的精準檢測技術(shù),基于泊松分布原理將核酸樣品分配到大量獨立、平行的微反應單元(納升級)中,使每個(gè)反應室中平均只有一個(gè)拷貝或者沒(méi)有目標DNA分子,然后加入熒光信號進(jìn)行擴增,從而實(shí)現靶標核酸分子的絕對計數,提高檢測靈敏度和準確度。

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